| 目前，我国水产养殖业尤其是虾类、贝类、鱼类受到病原微生物的侵扰十分严重，如何对水产动物疾病进行快速、准确的预报与诊断，是摆在养殖业面前的第一道门坎。近些年来，生物技术的发展已为病原体的检测提供了快速、高效、灵敏的技术手段。 1单克隆抗体 单克隆抗体是由单个细胞传代所产生的高纯度、高特异性的抗体。它与常规血清抗体相比，具有更强的特异性与针对性，且制备简单，因而在病原检测中得以广泛应用。80年代后期，已成功研制出传染性胰腺坏死病毒、出血病毒等单克隆抗体，并用于鱼类多种疾病的诊断。近年来。有学者已成功制备了抗鳗弧菌的单抗和抗嗜水气单胞菌的单抗。我国在单克隆抗体技术中，将其应用于检测草鱼出血病毒和对虾白斑病毒，均获得了较为 2酶联免疫吸附 酶联免疫吸附检测(ELISA)是将抗原或抗体吸附在载体表面，通过酶与底物显色来检测特异性抗原或抗体的技术。该技术具有反应迅速、特异性强、灵敏度高等特点。目前，ELISA在鱼类病原体检测上的应用较广，国内诸多学者将此技术用于疾病检测上，如李焕荣等(1997)应用Dot－ELISA快速检测出了嗜水气单胞菌的致病因子胞外蛋白酶AhECPase54；黄?(1995)应用单克隆抗体酶联免疫技术检测到了对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒；陈怀青等(1993)应用Dot－ELISA检测到了鱼类致病性嗜水气单胞菌hec毒素。国外对此项技术的研究较国内早，广泛用于对疖疮病、红嘴病、细菌性肾脏病以及爱德华菌病等的快速检测与诊断。此外，Noel等将ELISA用于菲律宾哈上，成功检测出了弧菌PI。满意的效果。 3核酸探针 核酸探针是指利用特定标记的DNA或RNA探针与病原生物中的与探针互补的靶核苷酸序列进行杂交，以此来确定宿主是否携带病毒的一类分子生物学技术。该方法以其灵敏度高、特异性强、简便快速等特点，在病原检测中倍受青睐。Futo，Hiney(1992)将此技术应用诊断细菌性鱼病，Comps等(1996)采用地高辛标记的RNA探针检测FEV病毒在鱼类中的表达，Bruce等(1994)利用DNA探针检测对虾杆状病毒。日本学者也采用地高辛标记的DNA探针进行菌落杂交，用于鳗弧菌的鉴定。我国学者黄?针对导致我国对虾大规模死亡的病原－皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)，已成功研制出核酸探针试剂盒，用于虾病的诊断。该法简便快捷，操作性强，已获国家专利。 4聚合酶链反应 酶链反应(PCR)技术是指在引物的指导下，体外酶促反应，迅速扩增DNA片段的一种方法。该法反应十分迅速，几小时内便可扩增到108－10倍，因而PCR技术具有高度的灵敏性。目前PCR在水产动物病原的操作中，已成功应用于毛蛤甲肝病毒，对虾桃拉病毒、的检测白斑病毒等，并研制出了诊断白斑病毒的检测试剂盒，可用于幼虾、成虾以及亲虾的带毒检测，同时还可对养殖环境中的宿主、底质、饵料等进行检测。另外有学者也报道了应用PCR技术检测贝类肠道病毒以及周围水体内的病菌等。 5细胞培养 当前，动物细胞培养也作为一类技术用于水产动物病原体的检测。如Lu等(1995)应用对虾淋巴器官原代培养细胞检测对虾黄头杆状病毒(YBV)。此外，水产动物细胞培养也可用于筛选抗菌药物、培育新型品种以及生产各类疫苗和免疫制剂等。  |
